LONZA 4D-Nucleofector LV 大規(guī)模流式細(xì)胞核轉(zhuǎn)染系統(tǒng)
——人T細(xì)胞大規(guī)模高效轉(zhuǎn)染

動(dòng)物細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)多樣，包括化學(xué)法、病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)、傳統(tǒng)電穿孔法等。

化學(xué)轉(zhuǎn)染磷酸鈣沉淀法、DEAE-葡聚糖、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染等，操作簡單快捷，但大部分原代細(xì)胞、干細(xì)胞、細(xì)胞系轉(zhuǎn)染效率低下，僅有少數(shù)貼壁細(xì)胞系轉(zhuǎn)染較高效，批次間重復(fù)性差。

使用慢病毒、腺病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒的病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)技術(shù)，雖然轉(zhuǎn)染效率高，但轉(zhuǎn)染底物有局限，轉(zhuǎn)染的基因片段大小需<10kb。且經(jīng)濟(jì)成本相當(dāng)高昂，需要提前包裝病毒，實(shí)驗(yàn)流程繁復(fù)，耗時(shí)1-2周。

傳統(tǒng)電穿孔技術(shù)，操作簡單快速，轉(zhuǎn)染基因限制少，但細(xì)胞毒性大、原代細(xì)胞成功率很低。



LONZA 4D-Nucleofector細(xì)胞核轉(zhuǎn)染系統(tǒng)，是在傳統(tǒng)電穿孔技術(shù)的基礎(chǔ)上，針對(duì)每一種細(xì)胞，優(yōu)化電脈沖參數(shù)、轉(zhuǎn)染液，使細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率、細(xì)胞活率得到顯著提升，解決了原代細(xì)胞、干細(xì)胞、T細(xì)胞等使用電穿孔轉(zhuǎn)染效率低下的問題。同時(shí)，4D-Nucleofector可讓外源基因直接穿過核膜進(jìn)入細(xì)胞核，不依賴細(xì)胞有絲，實(shí)現(xiàn)2小時(shí)快速表達(dá)。



LONZA全qiu共享數(shù)據(jù)庫，包含超過1500種原代細(xì)胞、細(xì)胞系的轉(zhuǎn)染數(shù)據(jù)，提供包括細(xì)胞來源、傳代、培養(yǎng)條件、培養(yǎng)基、到轉(zhuǎn)染后培養(yǎng)技巧的成熟流程，讓研究者在海量數(shù)據(jù)支持中快速開展實(shí)驗(yàn)，并取得成功。操作4D-Nucleofector核轉(zhuǎn)染系統(tǒng)時(shí)，只需一鍵調(diào)用LONZA內(nèi)置的轉(zhuǎn)染程序，即可實(shí)現(xiàn)細(xì)胞快速、高效轉(zhuǎn)染，而無需自行摸索轉(zhuǎn)染條件。

LONZA 4D-Nucleofector LV大規(guī)模流式細(xì)胞核轉(zhuǎn)染系統(tǒng)，可提供單次zui高2×10^9個(gè)細(xì)胞、封閉、無菌的高效轉(zhuǎn)染，在人T細(xì)胞、CHO懸浮細(xì)胞、HEK23懸浮細(xì)胞、K562細(xì)胞等超過700種細(xì)胞中大量應(yīng)用。

1、封閉、無菌的系統(tǒng)和耗材設(shè)計(jì)，滿足細(xì)胞治療基礎(chǔ)研究需求。


2、規(guī)?？珊唵畏糯?/span>，在4D-Nucleofector X模塊上進(jìn)行的2×10^4細(xì)胞數(shù)量的優(yōu)化轉(zhuǎn)染方案，可直接在LV上使用。


3、符合cGMP要求，可使用符合美國FDA21 CFR part 11、歐盟Annex 11的軟件進(jìn)行控制，適用于嚴(yán)格監(jiān)管的GMP實(shí)驗(yàn)室。

①用戶管理（登陸，不同級(jí)別）
②具有用戶姓名與時(shí)間標(biāo)記的電子簽名
③任何記錄的修改或是數(shù)據(jù)的創(chuàng)建均被記錄在案
④結(jié)果報(bào)告：失敗報(bào)告，以及詳細(xì)的問題描述
⑤可根據(jù)21CFR part11的要求導(dǎo)出數(shù)據(jù)（加密，預(yù)防）
⑥審計(jì)追蹤（使用記錄、更改記錄）
⑦無數(shù)據(jù)刪除可能

4、操作靈活，提供單次1mL（最多1×10^8個(gè)細(xì)胞）的手動(dòng)加樣、20×1mL（最多2×10^9個(gè)細(xì)胞）的自動(dòng)加樣，快速高效。


分別用4D-Nucleofector細(xì)胞核轉(zhuǎn)儀X模塊（100μL）、LV模塊（1mL）向包括人T細(xì)胞、PBMC、293細(xì)胞、CHO細(xì)胞在內(nèi)多種代表性細(xì)胞中轉(zhuǎn)染pmaxGFP載體，實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)染規(guī)模的線性放大。



LONZA 4D-Nucleofector LV大規(guī)模流式細(xì)胞核轉(zhuǎn)染系統(tǒng)，基因治療基礎(chǔ)研究的不二工具。

1、作為非病毒轉(zhuǎn)染技術(shù)，適用于不同的基因編輯系統(tǒng)，如鋅指核酸酶(ZFN)、轉(zhuǎn)錄激活因子樣效應(yīng)物核酸酶（TALEN）、CRISPR/Cas系統(tǒng)。

2、可轉(zhuǎn)染多種不同的底物，如DNA、mRNA、蛋白（如Cas9 RNP），由于轉(zhuǎn)染條件相同，可進(jìn)行不同底物的簡單共轉(zhuǎn)染。

3、常用于應(yīng)用iPS、CD34+造血干細(xì)胞、T細(xì)胞的穩(wěn)定修飾。

4、技術(shù)成熟可靠，有≥80本相關(guān)出版物刊載，眾多領(lǐng)域的zhi名學(xué)者正在使用4D-Nucleofector技術(shù)，quan球發(fā)表文章超過10,000篇，并持續(xù)不斷增加中！

LONZA 4D-Nucleofector大規(guī)模流式核轉(zhuǎn)染系統(tǒng)，作為轉(zhuǎn)染人原代T細(xì)胞的強(qiáng)大方法，與CRISPR和其他基因編輯技術(shù)的聯(lián)合應(yīng)用，已成為基因治療基礎(chǔ)研究的理想工具。

參考文獻(xiàn)
1.Closed-system transposon-mediated manufacture of GMP grade CAR T-cells via the Lonza Nucleofector LV XL. LM Brownrigg,et al. ELSERIER(2020)

2.Biomimetic mineralized collagen scaffolds and their effect on osteogenic differentiation. L Luo,et al. ELSERIER(2020)

3.Optimization of clarification process for viral vectors. B Raghavan,et al. ELSERIER(2020)

4.Generation and testing of clinical-grade exosomes for pancreatic cancer. Mayela Mendt,et al. JCI Insight(2018)

5.Off the shelf T cell therapies for hematologic malignancies. BJ McCreedy,et al. ELSERIER(2018)

6.Unlocking the Potential of CRISPR-Based Gene Editing. Andrea Toell. Genetic Engineering & Biotechnology News(2017)